厭氧培養(yǎng)箱是用于培養(yǎng)厭氧微生物的關(guān)鍵設(shè)備,使用時(shí)需嚴(yán)格遵守操作規(guī)范以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和人員安全。以下是主要注意事項(xiàng):
一、操作前準(zhǔn)備
1. 檢查氣源
確認(rèn)氮?dú)?、氫氣、二氧化碳?xì)馄繅毫Τ渥悖ㄍǔP琛?MPa),氣體純度≥99.99%,避免雜質(zhì)影響厭氧環(huán)境。
檢查氣體管道連接是否密封,防止泄漏。
2. 預(yù)還原培養(yǎng)基
培養(yǎng)基使用前需煮沸驅(qū)氧并迅速冷卻,或添加還原劑(如半胱氨酸、刃天青指示劑),確保無(wú)氧狀態(tài)。
3. 設(shè)備密封性檢查
關(guān)閉艙門后,用肥皂水檢測(cè)接口和手套是否有漏氣(氣泡產(chǎn)生),確保密封性。
二、操作過(guò)程注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格除氧程序
先通入氮?dú)庵脫Q空氣(3 5次循環(huán)),再通入混合氣體(如N?:CO?:H?=85:10:5),最后通過(guò)鈀催化劑去除殘余氧氣。
使用氧濃度檢測(cè)儀確認(rèn)艙內(nèi)O?濃度<1%(理想值<0.1%)。
2. 樣品傳遞規(guī)范
使用專用傳遞艙:先抽真空再充氮?dú)猓ㄖ貜?fù)2 3次),避免氧氣進(jìn)入主艙。
傳遞物品需表面消毒,減少污染風(fēng)險(xiǎn)。
3. 溫度與濕度控制
維持培養(yǎng)溫度(通常35 37℃),濕度建議60 80%,防止培養(yǎng)基干燥。
4. 安全操作
禁止明火:氫氣為易r氣體,操作時(shí)關(guān)閉火源。
戴手套避免直接接觸培養(yǎng)物,防止生物污染。
三、日常維護(hù)
1. 催化劑活化
鈀催化劑(除氧劑)每2 3個(gè)月于160℃烘烤2小時(shí)再生,失效時(shí)需更換(顏色變深或除氧效率下降)。
2. 清潔與消毒
每周用75%酒精或?qū)S孟緞┎潦门擉w內(nèi)壁、手套和傳遞艙。
污染時(shí)立即停機(jī),滅菌(如過(guò)氧化氫熏蒸)。
3. 定期檢查
檢查壓力表、傳感器、電磁閥是否正常,氣體流量是否穩(wěn)定。
四、常見(jiàn)問(wèn)題處理
氧氣泄漏:立即關(guān)閉氣源,檢查密封圈或手套是否破損。
培養(yǎng)污染:排查傳遞艙滅菌是否手套是否有裂縫。
設(shè)備報(bào)警:記錄錯(cuò)誤代碼,聯(lián)系廠家技術(shù)支持,勿自行拆解。
五、安全警示
氫氣風(fēng)險(xiǎn):保持通風(fēng),安裝氫氣檢測(cè)報(bào)警器,避免濃度≥4%(爆炸下限)。
生物安全:處理病原微生物時(shí)需符合實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)要求(如BSL 2)。
正確使用和維護(hù)厭氧培養(yǎng)箱可延長(zhǎng)設(shè)備壽命并確保實(shí)驗(yàn)可靠性。建議定期培訓(xùn)操作人員,并保存完整的設(shè)備使用記錄。
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